O efeito do micofenolato mofetil nos podócitos na nefrite sérica nefrotóxica

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 14167 (2023) Citar este artigo

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O micofenolato mofetil (MMF) é aplicado em doenças renais proteinúricas, mas o mecanismo exato de seu efeito nos podócitos ainda é desconhecido. Nossos experimentos in vitro anteriores sugeriram que o MMF pode melhorar o dano aos podócitos através da restauração do eixo do citoesqueleto Ca2 + -actina. O objetivo deste estudo foi caracterizar a biologia podocitária durante o tratamento com MMF na nefrite sérica nefrotóxica (NTS) (NTN). A NTN foi induzida em camundongos selvagens com três semanas de idade. No dia 3, metade dos camundongos foram tratados com MMF (100 mg/kg de peso corporal/d po) durante uma semana. No dia 10, realizamos análise proteômica dos glomérulos, bem como imagens de super-resolução do diafragma em fenda. Para imagens multifotônicas da concentração de Ca2+ ([Ca2+]i), o desenho experimental foi repetido em camundongos expressando sensor de Ca2+ específico para podócitos. O MMF melhorou a proteinúria e a formação de crescentes induzidas pelo NTS. Identificamos mudanças significativas na abundância de proteínas envolvidas na sinalização de Ca2+ e na regulação do citoesqueleto de actina, o que foi confirmado por imagem direta de [Ca2+]i em podócitos mostrando diminuição dos níveis de Ca2+ após o tratamento com MMF. Isto foi associado a uma tendência à restauração da estrutura do processo do pé podócito. Aqui, fornecemos evidências de que o MPA tem um efeito direto substancial nos podócitos. O MMF contribui para a melhoria do [Ca2+]i e para a melhoria do citoesqueleto de actina desorganizado nos podócitos. Esses dados ampliam o conhecimento dos efeitos diretos dos imunossupressores nos podócitos que podem contribuir para um tratamento mais eficaz das glomerulopatias proteinúricas com o mínimo de efeitos colaterais possíveis.

As glomerulopatias são responsáveis ​​por 5–14% das crianças com doença renal crónica e 15–29% das crianças com insuficiência renal em todo o mundo1. Muitos pacientes com glomerulopatias só podem ser mantidos em remissão com tratamento prolongado com esteróides. Porém, o uso deste medicamento por tempo prolongado resulta em efeitos adversos graves. Portanto, especialmente os pediatras têm investigado opções terapêuticas alternativas poupadoras de esteróides, como o micofenolato mofetil (MMF), nesta população vulnerável2.

O MMF, o pró-fármaco do ácido micofenólico biologicamente ativo (MPA), atua como um inibidor potente e reversível da IMPDH, a enzima chave na biossíntese de novo de purinas em linfócitos em proliferação, suprimindo assim as respostas imunes mediadas por células e a formação de anticorpos3. O primeiro estudo sobre os efeitos renais do MMF mostrou que ele previne o processo de rejeição crônica do aloenxerto, diminuindo a expressão de moléculas de adesão e citocinas nos glomérulos, prevenindo assim a glomeruloesclerose4. Nas últimas duas décadas, o MMF foi estabelecido e amplamente utilizado também em glomerulopatias inflamatórias5.

Além do bem caracterizado efeito imunossupressor, pouco sabemos sobre como o MMF atua diretamente no tecido renal, especialmente nos podócitos6,7. Na nefropatia diabética, foram observadas menor taxa apoptótica de podócitos e expressão preservada de nefrina e podocina no grupo tratado com MMF8. Isto está de acordo com os resultados de um modelo de puromicina onde a inibição da IMPDH restaurou o pool de ATP, que reteve a expressão de nefrina e sinaptopodina e estabilizou o citoesqueleto de actina9. Além disso, Fu et al. mostraram um efeito direto do MMF em uma doença renal imunomediada: camundongos MRL/lpr foram tratados com MMF. Posteriormente, o sequenciamento de RNA realizado no córtex renal isolado mostrou uma diminuição significativa da expressão do gene Rac1, que interrompe a formação de fibras de estresse fisiológico, quando ativado10. Em consonância com isso, nossos experimentos in vitro anteriores realizando sequenciamento de RNA de uma linha celular de podócitos tratada com MPA revelaram um acúmulo dos termos “citoesqueleto de actina” e “regulação da pequena transdução de sinal mediada por GTPase”. Adicionalmente, também foram enriquecidos os termos “atividade do canal de cálcio” e “transporte de íons de cálcio”11. O aumento da concentração intracelular de cálcio ([Ca2+]i) nos podócitos12 pode levar à reorganização aguda do citoesqueleto de actina ou mesmo ao colapso do citoesqueleto e à proteinúria13,14,15,16. No presente estudo, queríamos confirmar se o MMF também é capaz de melhorar o dano podocitário através da restauração do eixo do citoesqueleto Ca2+-actina em um modelo in vivo de nefrite sérica nefrotóxica (NTN).